TOP前言

“TOP大学来了”小编认为，其他科学家利用NgAgo做研究，与韩春雨之间无任何关联。韩必须能重复自己的实验，否则，这个定性不会有改变！

原核Argonautes(pAgos)已被提议作为更灵活的基因编辑工具，因为与流行的CRISPR/Cas系统不同，它们不需要与其功能目标相邻的序列基序。来自嗜盐古菌Natronobacteriumgregoryi的一种有前途的pAgo(NgAgo)候选物一直是关于其在真核系统中潜力的争论的主题。

2021年9月3日，普渡大学KevinVSolomon团队在NucleicAcidsResearch（IF=16.97）在线发表题为“NgAgopossessesguidedDNAnickingactivity”的研究论文，该研究发现NgAgo在非嗜盐宿主中表达不佳，即使在重折叠后，大多数蛋白质仍不溶且无活性。然而，可溶性部分确实起到了切割DNA核酸内切酶的作用。NgAgo与其他具有催化活性的pAgo共享规范域，但也包含以前无法识别的单链DNA结合域(repA)。repA和规范的PIWI结构域都参与了NgAgo的DNA切割活动。NgAgo可以在大肠杆菌中和体外在指导序列3'末端外1nt处切割靶向DNA。该研究还发现，这些核酸内切酶活性对于大肠杆菌中增强的NgAgo引导的同源重组或基因编辑至关重要。

总的来说，该研究发现NgAgo是一种新型DNA核酸内切酶，属于由特征repA结构域定义的未被识别的pAgo类。NgAgo使用PIWI中保守的和新的未表征的repA结构域来切割DNA。NgAgo的这种切割介导原核生物中的基因编辑作用。该研究工作建立了探索NgAgo活性（以及其他pAgo的活性）的创新方法，并确定了将其发展为下一代合成生物学工具的关键蛋白质特征。

基因编辑是一种通过靶向修饰改造基因组的新技术。自发现以来，CRISPR/Cas9系统已成为基因组编辑库中最强大的工具之一。尽管CRISPR/Cas9系统受到研究人员的欢迎，但它也有其不完善之处。CRISPR/Cas9系统对靶标识别的几种脱靶活性和PAM要求限制了其在某些基因组序列中的应用。因此，寻找新的基因编辑方法仍然是一个好的选择。除了Cas9蛋白家族外，有研究报道Argonaute(Ago)蛋白家族，包括TtAgo和PfAgo，也具有一定的基因编辑能力。

在原核生物和真核生物中都发现了Argonautes。在真核生物中，Argonaute蛋白是RNA诱导的沉默复合物(RISC)的重要组成部分。真核生物Ago蛋白在RNA干扰(RNAi)、microRNA和piwi相互作用RNA(piRNA)介导的转录后沉默中起着至关重要的作用。一些原核Ago蛋白，如TtAgo和PfAgo，可以诱导外源基因在小干扰核酸或引导DNA(gDNA)的指导下降解。然而，TtAgo和PfAgo通常在65°C左右起作用，限制了它们在哺乳动物细胞中的应用。

2016年5月3日，韩春雨团队在NatureBiotechnology在线发表题为“DNA-guidedgenomeeditingusingtheNatronobacteriumgregoryiArgonaute”的研究论文，该研究发现NatronobacteriumgregoryiArgonaute（NgAgo）是一种DNA引导的核酸内切酶，适用于人类细胞的基因组编辑，这一下子使NgAgo火遍全球，广大研究人员去验证其效果，很不幸，没有相关的团队能确定NgAgo有基因编辑的功能。随后引发广泛质疑，2017年8月3日，韩春雨撤回该论文。

NgAgo专门切割与向导互补的DNA（图源自NucleicAcidsResearch）

不过，其他团队有另外的发现，南通大学刘东团队在《CellResearch》发表题为“NgAgo-basedfabp11ageneknockdowncauseseyedevelopmentaldefectsinzebrafish”的研究论文，该研究发现gDNA/NgAgo可以与靶基因结合以阻断其转录，同时该研究也没有发现NgAgo具有基因编辑的能力。

该研究重新表征NgAgo在原核生物中的功能。NgAgo在非嗜盐宿主中表达不佳，即使在重折叠后，大多数蛋白质仍不溶且无活性。然而，该研究发现可溶性部分确实起到了切割DNA核酸内切酶的作用。NgAgo与其他具有催化活性的pAgo共享规范域，但也包含以前无法识别的单链DNA结合域(repA)。repA和规范的PIWI结构域都参与了NgAgo的DNA切割活动。

NgAgo可以被编程为靶向大肠杆菌中的DNA（图源自NucleicAcidsResearch）

NgAgo可以在大肠杆菌中和体外在指导序列3'末端外1nt处切割靶向DNA。该研究还发现，这些核酸内切酶活性对于大肠杆菌中增强的NgAgo引导的同源重组或基因编辑至关重要。总的来说，该研究结果证明了NgAgo在基因编辑方面的潜力，并为看似矛盾的报告提供了新的见解。

2019年1月，华中农业大学张安定，金梅林，韩丽及同济大学项耀祖共同通讯在NucleicAcidsResearch在线发表题为“TheprokaryoticArgonauteproteinsenhancehomologysequence-directedrecombinationinbacteria”的研究论文，该研究发现NagonobacteriumgregoryiArgonaute（NgAgo）以80-100％的效率增强巴斯德氏菌和大肠杆菌中的基因插入或缺失，有趣的是，在其他pAgos蛋白中也观察到这种效应，包括ThermusthermophilusArgonaute（TtAgo），AquifexaeolicusArgonaute（AaAgo）和PyrococcusfuriosusArgonaute（PfAgo）。NgAgo作为一种独立于其潜在酶活性的有效阳性选择系统，主要通过其与重组酶A（recA）相互作用的PIWI样结构域来增强recA介导的DNA链交换。该研究揭示了一种用于增强细菌中同源序列指导基因编辑的新系统。

在2019年4月，普渡大学KevinSolomon团队在bioRxiv平台在线发表了题为“NgAgo-enhancedhomologousrecombinationinE.coliismediatedbyDNAendonucleaseactivity”的研究论文，该论文与张安定等人的结果类似。

最初在真核生物中发现Argonaute蛋白（Agos）作为RNA干扰系统中的关键蛋白。真核Agos和原核Agos（pAgos）主要有2个部分组成，其中一个叶由氨基末端（N）和PIWI-Argonaute-Zwille（PAZ）结构域组成，而另一个由中间组成（MID）和PIWI构成。MID和PAZ结构域通常形成结合口袋，其分别促进寡核苷酸指导的5'和3'末端的锚定。在靶标结合上，催化活性Agos的PIWI结构域（含有DEDX基序，其中X表示D，H或N（31））介导体外同源DNA靶标或RNA靶标的切割。这些表明原核生物Argonaute蛋白作为一种新型基因编辑工具的潜力。

“TOP大学来了”小编认为，来自普度大学、南通大学、华中农业大学的科学家们在NgAgo上得到了一些新的进展，但这些新进展与韩春雨的实验无关，这些科学家也并未重复韩春雨的结果。韩的文章之所以被撤回，不仅是因为别人重复不了他的结果，甚至连他自己都重复不了。否则，老早就翻案了。

参考消息：

https://link.springer.com/article/10.1007%2Fs12033-021-00372

DNA-dependentRNAcleavagebytheNatronobacteriumgregoryiArgonaute.BioRxiv.https://doi.org/10.1101/101923

https://academic.oup.com/nar/advance-article/doi/10.1093/nar/gkab757/6363767

审核、编辑：大可

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